• طريقة الاليزا ( ElISA ) ( Enzyme linked immunsorbent assay )

  • بواسطة العضو : Mohamed Negm

    عدد المشاهدات : 1473 مره
  • طريقة الاليزا ( ElISA ) ( Enzyme linked immunsorbent assay )
  • احدى الطرق التى تستخدم اما لتحديد نسبة انتيجين مجهول فى العينة (الطريقة المباشرة) او تحديد نسبة أجسام مضادة فى العينة ( الطريقة غير المباشرة)
    تستخدم بصورة كبيرة فى تحاليل المناعة والهرمونات وكذلك الفيروسات

    * قبل البدء فى شرح الطريقة يجب تذكر معلومة هامة فى علم المناعة وهى فكرة المناعة المتخصصة والتى تعتمد عليها فكرة هذة الطريقة
    وهى أنة عند دخول جسم غريب الى جسم الطائر يقوم جهاز المناعة بتكوين أجسام مضادة ضد انتيجينات هذا الجسم الغريب وتظل موجودة فى الجسم فيما يسمى الذاكرة المناعية , تكون هذة الاجسام المضادة خاصة بالانتجين الذى تكونت من أجلة فقط ومن هنا تأتى الفكرة فعنما نريد أن نبحث عن انيجين معين فى عينى نأتى بالاجسام المضادة المتخصصة لة فترتبط بة والعكس صحيح

    Instrument in these section:
    =================
    1- Centrifuge used routinely.
    2- Incubators (In).
    3- Water Path (w.p)
    4- Shaker (sh)
    5- ELISA washer (washer).
    6- ELISA Reader (Reader)+ Printer (P).
    7- Automated ELISA (Auto. ELISA)
    8- Refrigerator for kits sample storage (R1,R2).
    9- Freezer for preservation of positive result sample (F).
    10- Fluorescent Microscope
    11- ID reader (IDR).
    Materials and Reagents :
    ===============
    Test Strips ----> Micro-wells containing antigens or antibodies - 96 test wells in a test strip holder. ----> MT PLATE
    Dilution Buffer ----> SPECM DIL
    Enzyme Conjugate ----> CONJ
    Positive Control ----> CONTROL +
    Negative Control ----> CONTROL -
    Chromogen or Substrate may be one or two (A & B) ----> SUBS - TMB
    Wash Concentrate concentrated buffer and surfactant ----> WASH BUF
    Stop Solution ----> SOLN
    * طريقة الاليزا المباشرة Direct Elisa
    تستخدم هذة الطريق لتحديد نسبة انتيجين مجهول فى العينة
    1- فى الاليزا عادة نستخدم أطبافق الاليزا وهو طبق مكون من صفوف وكل صف مكون من 8 ويلات (نقرات) وعاة يكون الطبق 96 ويل
    2- تكون جدران الويلات مغطاة بالاجسام المضادة الخاصة بالانتيجين المراد الكشف عن وجودة
    3- عند اضافة العينة الى الويل تقوم الاجسام المضادة الموجودة على جدران الويل بالارتباط بالانتيجن اذا وجد فى العينة (Buffer)
    4- يتم غسيل الويل للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة والانتيجنات الاخرى الغريبة ويتبقى الانتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود على جدار الويل
    (antibody antigen complex)
    يسمى الجسم المضاد المرتبط بالانتجين (معقد الانيجين والجسم المضاد)
    5- يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل هذا الجسم المضاد الثانى مع مع معقد الانتيجين والجسم المضاد (conj. Enzyme)
    6- تكرر عملية الغسيل مرة أخرى للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة
    7- يتم اضاف الخطوة الاخيرة وهو مركب (substrate or TMP)
    يقوم الانزيم المرتبط فى الجسم المضاد الثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لون
    8- Stop solutionيتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمى
    9- يتم القراءة على جهاز قراءة الاليزا عند الطول الموجى المناسب
    تتناسب قوة امتصاص هذا اللون مع تركيز الانيجين المجهول فى العينة
    ويأتى مع كل كيت اليزا عدة استاندرات (6 غالبا) بتركيزات متدرجة معلومة يتم عمله مع الاختبار المطلوب ثم يتم رسم منحنى قياسى يمثل
    concentrationوالتركيز absorbanceالعلاقة بين قوة الامتصاص
    ويتم حساب النتائج من هذا المنحنى
    * طريقة الاليزاغير المباشرة In Direct Elisa
    فى هذة الطريقة نبحث عن الاجسام المضادة المجهولة فى العينة
    نفس خطوات الاليزا المباشرة
    ولكن فى هذة الطريق نبحث عن الاجسام المضادة المجهولة فى العينة
    فتكون جدران الويلت مغطاة بالانتيجنات الخاصة بالاجسام المضادة المراد الككشف عنها وباقى الخطوات هى نفسها

    حساسية فحص الاليزا
    يعتبر فحص الاليزا من الفحوصات الأكثر حساسيه المتوفرة. ويمكنه الكشف على تراكيز واطئة من المواد تتراوح بين 0.01-0.1 نانوغرام.

    مصدر المعلومات مأخوذ بتصرف من
    An Introduction to ELISA
    www.abdserotec.com/an-introduction-to-elisa.html
    مع خالص تحياتى :
    م:محمد حسينى نجم
    د.ماجستير تغذية الدواجن ,جامعة الزقازيق

  • المقال يعبر فقط عن رأى الكاتب ولا يعبر بالضرورة عن رأى الموقع

للمشاركة وإضافة تعليقاتك وأرائك سجل دخول
أضف تعليقك

إقرأ أيضا..

» المزيد

فيروس الإنفلونزا H9N2 مع الميكروبات الثانوية - التشخيص والوقايه والعلاج

إن من أخطر وأشرس الأمراض التي تهدد صناعة الدواجن هو فيروس طاعون الدجاج  نعم طاعون الدجاج هكذا سمي هذا الفيروس منذ اكتشافه عام 1871 واستمرت هذه التسمية إلي عام 1981…

عدد المشاهدات : 14932 مرة التفاصيل

مرض نيوكاسل (شبه طاعون الدجاج) ND

الكاتب دكتور ياسر الباهى

عدد المشاهدات : 7982 مرة التفاصيل

اهم الاسباب التى تؤدى لوجود علف غير مهضوم فى زرق الدواجن ونقص الاوزان ومعامل التحويل

يخطئ الكثيرين عندما يعتقدو ان وجود العلف غير مهضوم فى زرق الدجاج بسبب الكلوستريديا فقط - - وساذكر لكم اسباب عديدة فى هذا المقال

عدد المشاهدات : 14476 مرة التفاصيل

أحتياطات هامة عند اعطاء الادوية او التحصينات فى ماء الشرب

أحتياطات هامة عند اعطاء الادوية او التحصينات فى ماء الشرب

عدد المشاهدات : 11275 مرة التفاصيل

بعض النصائح بعنوان.. « منهاج تربية الدواجن »

اليوم سانزل لكم موضوع حساس خاص لمربيو الدجاج عن انتاج دجاج اللحم باختصار لنبدا
اولا يجب ان تكون لك مساحة للتربية عنبر متوفر علي ظروف التربية نلخصها في مايلي ...

عدد المشاهدات : 16363 مرة التفاصيل

فوائد الأملاح المعدنية Minerals فى الدواجن

هو الجزء غير العضوي من الكلفة ويقسم إلى العناصر الكبرى والصغرى على أساس الكميات المطلوبة في العلائق وتقدر الاحتياجات كنسبة مئوية من العلائق وتضاف بكميات صغيرة على أساس المللى جرام…

عدد المشاهدات : 16812 مرة التفاصيل

حظائر الدجاج وأنواعها ومميزات كل منها.

وهي الأماكن المخصصة لايواء الدواجن سواء كان لانتاج اللحم الفروج ,او لانتاج البيض أو للتربية.

عدد المشاهدات : 43351 مرة التفاصيل

ترجمة للملخص البحثى لبحث عن استخدام الزعتر او حمض الفورميك فى تغذية بدارى التسمين - البحث لسنة 10/2016

فى البداية , الموضوع هيبقى علمى شوية ,لاكن ترجمتى للملخص البحث حاولت انى ابسط المعلومة وان شاء الله فى سلسلة كاملة من الابحاث الى بترجمها حاليا لمساعدة مربين الدواجن على…

عدد المشاهدات : 2703 مرة التفاصيل

تحقيق الزيادة الوزنية للتسمين بطرق مبسطة

الاسباب التي تؤدي إلى الزيادة الوزنية الاسبوعيه في الدجاج الابيض تسمين لكي تتمكن من تحقيق أقل معامل تحويل أي اكبر وزن من أقل كمية علف ومع…

عدد المشاهدات : 25399 مرة التفاصيل
أضف إعلانك الآن فى وسيط موقع الدجاج
  • أضف بياناتك ليصلك كل جديد
  • البريد الألكترونى:
  • رقم الجوال:
  • ما علاقتك بالدواجن؟